顯微鏡是人類歷史上的偉大發(fā)明之一，在整個顯微鏡的發(fā)展史上有兩次重大突破，分別是光學顯微鏡和電子顯微鏡的發(fā)明。

現(xiàn)在，顯微技術(shù)領(lǐng)域可能正迎來第三次革命——“DNA 顯微鏡”問世！

2019 年 6 月 20 日，CRISPR 基因編輯重要貢獻者張鋒教授及其霍華德·休斯醫(yī)學研究所（HHMI）的同事，在 Cell雜志發(fā)表重磅成果，他們開發(fā)出一種全新的 “DNA 顯微鏡”，可以建立細胞的圖像，同時收集大量的基因組信息。

人類顯微視角進入新疆域

基于光學的顯微鏡，可以追溯到 17 世紀，它打開了人類對微觀世界的認識。光學顯微鏡主要依靠可見光照射樣本，通過一組透鏡組合來放大物品。

在生物醫(yī)學領(lǐng)域，光學顯微鏡的發(fā)明是一項革命性的技術(shù)突破，令我們認識到生命體的基本單位為細胞，同時大大助力人類對疾病的認知與防治，比如青霉素的發(fā)現(xiàn)。

之后科學家們又對光學顯微方法進行了反復升級，甚至超越了可見光譜。

1913 年恩斯特·魯斯發(fā)明的電子顯微鏡，更是將顯示水平拉到原子級別。它讓研究人員可以在原子水平去了解生理學過程及單個分子的結(jié)構(gòu)。

如今，科學家已經(jīng)可以使用光、x 射線和電子來觀察組織和細胞內(nèi)部。

大家熟悉的電子顯微鏡、熒光顯微鏡、薄層顯微鏡，它們都是基于探測樣品發(fā)射光子或電子的原理進行觀測的。通過這類顯微鏡，科學家們可以追蹤大腦中類似絲狀的神經(jīng)纖維，甚至可以觀察活的老鼠胚胎如何產(chǎn)生原始心臟的跳動細胞。

然而，這些顯微鏡都無法看到在基因組水平的細胞中發(fā)生了什么。

為了對核酸水平進行直接觀測，實驗室及臨床中大多依賴分子探針技術(shù)，即將與待觀察核酸互補的堿基對導入細胞中，利用堿基互補配對原則標記待測核酸，再通過熒光等其他顯色物質(zhì)來顯示待測核酸。這種間接方法雖能令研究者觀測核酸，但其標本制備過程繁瑣，耗時耗力。

而此次張鋒教授研發(fā)的 DNA 顯微技術(shù)，通過獨特的成像模式，采用特殊的成像原理，可將物理圖像編碼 DNA，先利用標記核酸的”堆疊“編碼每一種核酸，再采用數(shù)據(jù)分析”投射“其物理圖像，從而實現(xiàn)對基因組的直接觀測。

最新的 DNA 顯微技術(shù)顯像原理與我們想象中的可能不同，并不是直接對 DNA 鏈進行顯示。這是由于 DNA 中的每個堿基分子在每個細胞內(nèi)存在的數(shù)量十分微小，哪怕我們直接標記，也很難直接觀測到其標記信號。

因此，張鋒教授的研究團隊采用了一個十分巧妙的方法來解決這一問題，他們采用了”堆疊“分子的化學合成法。

首先，研究人員將待測細胞滴在載玻片上，并進行相應(yīng)的固定。隨后，往細胞內(nèi)注入各種各樣的 DNA 標記物（這里用的是 cDNA 片段），這些 DNA 標記物會連接到與其互補的 RNA 分子上，使其具有唯一的標簽。

但到此為止，我們還是不能直觀地觀測基因組，所以化學合成法派上用場了，研究人員以這些導入的 DNA 標記物為模板，大量擴增其副本，使每一個標記核酸都掛著”一大堆標記副本“，這樣通過”分子堆疊“就使的相鄰的標記分子相互碰撞，進而使它們連在一起。

該研究的主要負責人之一 Joshua A. Weinstein 教授表示，可以把每一個分子想象成一個向外發(fā)射自己信號的無線電發(fā)射塔?？康脑浇敲淳涂梢援a(chǎn)生更多的 DNA 對，”分子堆疊“效應(yīng)更明顯，反之，靠的越遠，這些 DNA 對越少，”分子堆疊“效應(yīng)更弱。

在這一過程進行大約 30 個小時后，研究人員就拼湊出識別每一堿基的”分子堆“，然后該團隊通過計算機算法解析這些”分子堆“信號，將原始樣本中的約 5000 萬個基因的堿基序列轉(zhuǎn)化為圖像，進而使實驗者在光學顯微鏡下觀測樣本基因組信息。

參與本項研究的霍華德·休斯醫(yī)學研究所研究員 Aviv Regev 表示，捕捉這樣一個細胞的完整圖像不需要昂貴的顯微鏡或很多昂貴的設(shè)備，只需要樣本和一根”吸管“就夠了。

可能引發(fā)生物醫(yī)學領(lǐng)域的重大突破

在 DNA 顯微技術(shù)原理及設(shè)備制備完成后，研究人員利用幾個我們熟知的基因?qū)?DNA 顯微技術(shù)的顯示效果進行了驗證。研究人員選擇了基礎(chǔ)實驗中最常用的幾種標記蛋白，研究發(fā)現(xiàn)，DNA 顯微技術(shù)能夠很好地重建普通熒光顯微鏡捕捉的細胞圖像。

Weinstein 教授表示，”你基本上能夠完全重建你在光學顯微鏡下看到的東西。這兩種方法是互補的。光學顯微鏡可以很好地看到分子，即使它們在樣品中稀疏，DNA 顯微技術(shù)在分子密集時，甚至在分子堆疊時，其也擁有十分出色的顯示效果?！?/p>

此次研究的核心研究者張鋒教授說，”每個細胞都有獨特的 DNA 堿基或基因型組成。通過直接從被研究的分子中捕獲信息，DNA 顯微技術(shù)開辟了一種將基因型與表型聯(lián)系起來的新方法“。這使得研究者可以更為直觀的將基因表達與蛋白功能表達聯(lián)系在一起，促進生物學各分支的飛速發(fā)展。

此次 DNA 顯微技術(shù)的發(fā)明是整個生物醫(yī)學領(lǐng)域的重大突破。每次顯微技術(shù)的突破都會帶來生物醫(yī)學領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)新的研究領(lǐng)域，比如冷凍電鏡的發(fā)明，直接將整個結(jié)構(gòu)生物學帶到新的高度。

因此，此次 DNA 顯微技術(shù)的開發(fā)，其意義并不局限于其自身技術(shù)的突破，更為重要的是其未來的應(yīng)用前景與潛力，這會激發(fā)其他研究者對基因型與表型關(guān)系、腫瘤特異性靶向藥物和受體阻斷劑等多個領(lǐng)域更為深刻的創(chuàng)造力。

免疫系統(tǒng)就是一個完美的例子，免疫細胞基因可以因一個堿基改變而變異，每一種變異都會引發(fā)細胞產(chǎn)生的抗體類型發(fā)生巨大變化，而細胞在組織中的不同位置也能改變抗體的產(chǎn)生。Weinstein 認為，有一天 DNA 顯微技術(shù)可以幫助科學家們加速癌癥免疫療法治療的發(fā)展，幫助患者的免疫系統(tǒng)自主對抗其體內(nèi)的腫瘤組織。他說，該方法可能潛在地識別出最適合靶向特定癌細胞的免疫細胞。

在 Regev 看來，這種顯微技術(shù)的潛力是非常大的?！蔽覀兿Ｍ芗ぐl(fā)人們的想象力，讓人們受到我們從未想過的偉大想法的啟發(fā)。“